Marekova nemoc (neurolymfomatóza, ptačí paralýza) je vysoce nakažlivé virové onemocnění kuřat a krůt, projevuje se ve dvou formách: klasické (poškození periferního a centrálního nervového systému) a akutní (lymfoidní leukémie). Nejnáchylnější jsou slepice a zvláště kuřata v prvních 2 týdnech života. Ale onemocní i krůty, bažanti, kachny, husy a labutě.
Markova choroba je rozšířena po celém světě, ale především v oblastech průmyslového chovu drůbeže.
Charakteristika budiče. Virus Markovy choroby patří do čeledi Herpesviridae, obsahuje DNA, má kapsidu ve tvaru dvacetistěnu sestávající ze 162 kapsomerů, membránu a obal superkapsidy. Průměr virionu je 85-170 nm. V těle ptáků se vyskytuje ve dvou formách: vázaná na buňky a bez integrace s buněčnými strukturami. Viriony, které dozrály se superkapsidovým obalem a jsou schopné infekce, se nacházejí pouze v epiteliálních buňkách folikulů peří.
Odolnost proti fyzikálním a chemickým vlivům. Stabilita jak v buňce vázané, tak volné formy viru se liší. Buněčný virus obsažený v krvi tak zůstává aktivní v nádorovém materiálu pouze za podmínky strukturální integrity buněk, která je zajištěna skladováním materiálu při minus 196 °C, zatímco volný virus se šupinami epitelu peřích folikulů v trusu je patogenní ve vzduchu drůbežárny až 12 měsíců
Antigenní variabilita. U viru Markovy choroby se shoduje s jeho sérologickou klasifikací. Sérotyp 1 zahrnuje všechny onkogenní viry a atenuované varianty, sérotyp 2 – všechny neonkogenní viry, sérotyp 3 – krůtí herpes virus, antigenně příbuzný viru Markovy choroby.
Studie patogenity prokázala, že ptáci infikovaní jedním kmenem viru byli trvale chráněni před infekcí jiným kmenem. Kromě toho se u stejného ptáka střídaly stavy virémie a nevirémie.
Ne všechny kmeny viru vykazují onkogenní vlastnosti. Předpokládá se, že virus Markovy choroby transformuje pouze T-lymfocyty. Zdá se, že onkogenní varianty viru kódují charakteristické antigenní determinanty, které v neonkogenních variantách chybí.
Transkribovaná virově specifická RNA v různých buňkách je kódována stejným fragmentem RNA.
Antigenní aktivita. Byl studován u nemocného ptáka v epitelu péřových folikulů. Vyšetření extraktu z folikulů peří v RDP může sloužit jako jednoduchý test pro detekci onkogenní infekce u kuřat. Detekce imunofluorescenčních a precipitujících antigenů v lemech peří je přitom spolehlivou metodou laboratorní diagnostiky.
Hemaglutinační a hemadsorpční vlastnosti. Není instalován.
experimentální infekce. Markova nemoc byla úspěšně a opakovaně reprodukována až na počátku 1960. let. Ukázalo se, že krev nebo nádorový materiál obsahující živé neporušené buňky mohou přenést onemocnění na vnímavá jednodenní kuřata. Citlivost na experimentální infekci je vyšší u jednodenních kuřat než u 1-, 2- a 3-týdenních kuřat. Všechna kuřata infikovaná ve věku jednoho dne zpravidla hynou, zatímco úmrtnost kuřat starých 10, 2 a 3 týdnů je 10, 60 a 30 %.
Pěstování. Provádí se v těle jednodenních kuřat a u kuřecích embryí ve věku 1 a 4-10 dnů při infekci na CAO a ve žloutkovém váčku. Infekce kuřecích embryí ve žloutkovém vaku vede k tvorbě charakteristických plaků na CAO. Kromě toho se virus dobře reprodukuje v kultivovaných fibroblastech a buňkách ledvin kuřecích a kachních embryí. V buněčných kulturách tvoří virus charakteristické plaky.
Klinické příznaky. Inkubační doba onemocnění trvá od 3 týdnů do několika měsíců. Úmrtnost se pohybuje od ojedinělých případů až po 80 %. V klasické formě je postiženo až 10% ptáků a v akutní formě – 20-30%.
Klasický průběh Markovy choroby se obvykle projevuje kulháním, parézou, ochrnutím končetin, křídel, krku, ocasu a vnitrozemí. Nemocný pták umírá ve věku 3-5 měsíců na dehydrataci a vyčerpání, což je považováno za důsledek mozkového edému. Onemocnění probíhá akutně i chronicky.
Akutní průběh Markovy choroby se projevuje náhle a je charakterizován masivní “tranzitní” paralýzou – téměř všechna kuřata ve věku 5-7 měsíců onemocní během 1-2 dnů. Po 2-6 týdnech se mortalita velmi zvyšuje v důsledku poškození vnitřních orgánů lymfoidními nádory. Lymfomy postihují parenchymální orgány, Fabriciovu burzu, brzlík, svaly a kůži. Onemocnění trvá asi 30 dní a má nespecifické projevy: deprese, chudokrevnost, kašel, zažívací potíže.
V chronickém průběhu je pozorována oční forma onemocnění, tzv. „oční leukémie“. V tomto případě je do procesu zapojena duhovka oka, která zbledne („šedooká“), zornice nereaguje na světlo. V některých ohniscích převažují kožní léze zvané kožní leukémie.
Existuje předpoklad, že klasický a akutní průběh jsou způsobeny dvěma odrůdami viru Markovy choroby, jejichž lokalizace v těle je různá.
Patologické změny. Virus Marekovy choroby způsobuje lymfoproliferativní onemocnění charakterizované buněčnou infiltrací nervového systému a také nádory v parenchymálních orgánech. Změny v centrálním nervovém systému jsou definovány jako nehnisavá difuzní encefalitida. Jsou pozorovány jednostranné léze bílé hmoty míšní. Nervová vlákna jsou oteklá, pruhování mizí, stávají se našedlé.
Při klasickém průběhu onemocnění je v mozku a míše zaznamenán perivaskulární a pericelulární edém, pyknóza nervových buněk a proliferace gliových a lymfoidních elementů. Často se do procesu zapojují vaječníky a varlata, kde dochází ke vzniku lymfomů z lymfocytů, histiocytů a plazmatických buněk.
V případě akutního průběhu onemocnění je neoplastický proces charakterizován tvorbou lymfomů v tkáních a orgánech. Lymfomy mohou postihnout gonády, játra, plíce, svaly, kůži, slezinu, ledviny, Fabriciovu burzu a brzlík. Nádory mohou být fokální, lokalizované nebo difúzní. Postižený orgán je zvětšený a bledý, protože je infiltrován lymfoidní nádorovou tkání. Gonády, játra, slezina, ledviny jsou zvětšené, s hladkým nebo hrbolatým povrchem, poseté difúzními nebo fokálními světle šedými uzly.
Imunomorfologickou metodou bylo zjištěno, že u akutní Markovy choroby jsou lymfomy tvořeny převážně populacemi T-lymfocytů.
Patologické změny u Markovy choroby mají někdy jednoznačně zánětlivý charakter.
Lokalizace viru. Virus se přenáší od nemocných ptáků a přenašečů viru aerogenně, přímým i nepřímým kontaktem, transovariálně (na skořápce) a dokonce i přenosným potemníkem. Virus proniká do krve přes sliznice a adsorbovaný na leukocytech se šíří po celém těle. Množí se v buňkách za vzniku nádorových ložisek v lymfoidních orgánech, epitelu ledvinových tubulů a péřových folikulů. Patogen proniká hematoencefalickou bariérou a postihuje mozek a míchu s kmeny a plexy. Stroma nervů srůstá s pojivovou tkání; nerv ztlušťuje, narušuje se nervový trofismus a metabolické procesy, dochází k vyčerpání a smrti.
Z nemocného ptáka je virus izolován z deskvamovaného epitelu folikulů kůže-peří, ze sekretů dýchacích cest a z výkalů. Pták, který se zotavil z nemoci, zůstává nosičem viru a agentem vylučujícím virus po celý život.
Zdroj a cesty přenosu infekce. Hlavním zdrojem onemocnění je nemocný pták, který vylučuje virus dýchacím a trávicím traktem, s odlupujícím se epitelem peřících folikulů a lupinami (virus bez buněk). Vstupní branou jsou dýchací cesty.
Přetrvávání viru v prostředí a jeho přenos vzduchem je důvodem vysoké nakažlivosti onemocnění. Infekční virus se přenáší vzduchem od prvního týdne života kuřete-dárce a pokračuje po dobu 3 týdnů v kontaktu se zdravým ptákem. Počínaje 2. nebo 3. týdnem po infekci uvolňují kuřata virus do vnějšího prostředí. Výsledek BM závisí na virulenci epizootického kmene, věku infikovaného ptáka a jeho geneticky podmíněné rezistenci.
Viremie, přenos viru a vylučování viru po infekci přetrvávají po celý život, navzdory stabilitě a přítomnosti precipitujících a virus neutralizujících protilátek.
Nemocný pták uvolňuje virus přes dýchací a trávicí orgány a také přes deskvamovaný epitel kožních peříčkových folikulů, jejichž epitel slouží jako místo pro množení viru.
Byla prokázána přímá souvislost mezi dozráváním viru ve folikulárních buňkách a nakažlivostí onemocnění.
Přenášení viru bylo pozorováno u klinicky zdravých ptáků během inkubační doby a klinických projevů onemocnění. Kromě toho byl také pozorován přenos viru 16-24 měsíců po onemocnění, tj. současně s protilátkami neutralizujícími a srážejícími virus.
Virový antigen tak může přetrvávat dlouhou dobu ve folikulech peří, zatímco ve viscerálních orgánech nebo nádorech vyvolaných neurálním virem v pozdějších stádiích buď zcela chyběl, nebo byl nalezen v malém počtu buněk.
diagnostika. Předběžná diagnóza je založena na analýze epidemiologických, klinických a patologických údajů. Pro stanovení konečné diagnózy se nemocným ptákům odebírá krev a roztrhané peří a z mrtvol se odebírají slezina, játra, brzlík a nádorové útvary.
Laboratorní diagnostika. Histologické studie se provádějí v laboratoři.
V RDP je detekován virový antigen v epitelu folikulů peří (účinnost metody je 98,7 %).
Virus Markovy choroby lze izolovat z patologického materiálu na kuřecích embryích. Infekce CAO suspenzí peříček je doprovázena tvorbou ložisek proliferace buněk na membráně. Infekce kuřecích embryí ve žloutkovém váčku krví a nádorovým materiálem z nemocných kuřat způsobuje smrt embryí. Virus je možné izolovat v buněčné kultuře.
Izolovaný virus je identifikován v RDP. Jeho patogenitu lze studovat u jednodenních kuřat.
Protilátky v krevním séru nemocných ptáků jsou detekovány v RDP a v hromadných studiích v ELISA.
Diferenciální diagnostika. Pro diferenciální diagnostiku Markovy choroby a ptačí leukémie, které jsou klinicky podobné, se v RNGA vyšetřuje krevní sérum nemocného ptáka (5 měsíců a více) na přítomnost skupinově specifického antigenu virů leukemie-sarkomu. skupina užívající lék k diagnostice ptačí leukémie.
Imunita a specifická profylaxe. Marekova nemoc je jediné nádorové onemocnění, kterému lze předcházet očkováním. Nejpoužívanější vakcínou na světě je vakcína založená na krůtí herpesvirus (THV) kmen FC-126. Důvodem bylo, že virus nevyžadoval atenuaci, není nebezpečný z hlediska reverze a prochází stabilizací v extracelulárním stavu. Vakcína GVI zabraňuje rozvoji onemocnění a nádorů. Zároveň nebrání infekci patogenním virem a jeho uvolňování do vnějšího prostředí. Pozitivním faktorem je, že aerosolová vakcinace kuřat s GVI se ukázala být stejně účinná jako intramuskulární injekce léku.
Bylo zjištěno, že nejvyšší ochranné vlastnosti mají polyvalentní vakcíny obsahující kmeny skupiny VBM-GVI sérotypů 1, 2 a 3. Navíc v tomto případě nebyl nárůst účinku výskytem interference, ale ochranným synergismem.
Autoři získali dobré výsledky jak u přirozeně oslabených (polních), tak u modifikovaných (atenuovaných) kmenů viru.
Byla stanovena korelace mezi schopností atenuovaných kmenů viru Markovy choroby přenášet se horizontálně a imunogenně. Postvakcinační virémie, zejména úroveň virové replikace v epiteliálních buňkách peřících folikulů očkovaných kuřat, slouží jako dobrý test imunogenicity vakcín. Při imunizaci proti Markově nemoci nemůže buněčná imunita a samotná humorální odpověď poskytnout ochranu. Funkční úlohou antivirových protilátek je neutralizovat bezbuněčný virulentní virus Markovy choroby a spolupracovat s normálními hostitelskými lymfomy při lýze buněk infikovaných virem.
Inaktivované vakcíny byly získány z celého viru s různým stupněm čištění a s přidáním různých inaktivantů a adjuvans. Byla prokázána možnost získání imunogenních léků, které neobsahují nukleovou kyselinu, ale mají odpovídající proteiny. Preparáty buněčných membrán infikovaných krůtím herpesvirem, emulgované s Freundovým adjuvans, se ukázaly jako vysoce imunogenní proti patogenním kmenům viru Markovy choroby. Imunizace kuřat rozpustnými antigeny extrahovanými z buněk infikovaných atenuovaným kmenem viru Markovy choroby snížila výskyt onemocnění u drůbeže 2-5krát.
Jednou z nejslibnějších oblastí je vytvoření rekombinantních virových vakcín exprimujících antigen viru Markovy choroby. Patentováno je například použití rekombinantního viru drůbežích neštovic s geny odpovídajícími jednomu nebo více antigenům viru Markovy choroby. Patentuje se další metoda tvorby nových vakcín proti Markově chorobě, která je založena na studiu sekvencí nukleových kyselin kódujících imunogenní polypeptidy 18 a 20 viru Markovy choroby.
Ve prospěch hypotézy dvoustupňové vakcinační imunity u Markovy choroby se tedy nashromáždilo mnoho dat. V první fázi je namířena proti virovým antigenům, ve druhé – proti nádorovým buňkám – nosičům povrchového antigenu asociovaného s nádorem.
Marekova nemoc (morbusMarec, ptačí neurolymfomatóza, ptačí paralýza) je vysoce nakažlivé virové onemocnění charakterizované tvorbou neoplastických nádorů v parenchymálních orgánech a zánětlivými procesy v periferním nervovém systému a změnami barvy duhovky.
Etiologie.Původcem onemocnění je komplexní virus z čeledi Herpesviridae obsahující DNA. Epiteliální a neurotropní. Kultivováno v kuřecích embryích a kultuře kuřecích fibroblastů. Má výrazné onkogenní vlastnosti a imunosupresivní aktivitu.
V odmítnutém epitelu péřových folikulů si virus zachovává své biologické vlastnosti až 8 měsíců, ve vrhu až 16 týdnů. Při 60°C dojde k inaktivaci během 10 minut.
epizootologie. V přirozených podmínkách jsou na Markovu nemoc nejcitlivější kuřata, nakazit se však mohou krůty, kachny a bažanti.
Kuřata ve věku 1-5 měsíců jsou náchylnější k infekci, slepice jsou náchylnější než kohouti. Kuřata plemen Leghorn a White Plymouth rock jsou k onemocnění nejnáchylnější. Zdrojem infekčního agens je nemocný nebo latentně nemocný pták. Ptáci přenášející virus jsou celoživotním zdrojem infekce. Nemocný pták uvolňuje virus dýchacími a trávicími orgány a také deskvamovaným epitelem folikulů kůže a peří. Virus se může přenést přímým kontaktem zdravého ptáka se zdrojem infekčního agens. Hlavní cesta vstupu viru do těla je považována za aerogenní. Byla zjištěna možnost přenosu viru některým hmyzem a klíšťaty.
Výskyt mezi kuřaty v prvních 2 týdnech života je 74% au kuřat starých 8-20 týdnů je 100%, mortalita může dosáhnout 30%.
Patogeneze.Virus adsorbovaný na leukocytech se šíří po celém těle a postihuje brzlík, Fabriciusovu burzu, slezinu, cekální mandle a epiteliální buňky péřových folikulů. Během procesu reprodukce viru se rozvíjí proliferace polymorfních buněčných elementů v orgánech a buněčná infiltrace periferních nervů mozku, očí a svalů.
Příznaky a průběh.Inkubační doba je 13-150 dní. Onemocnění probíhá akutně (nádorová, leukémii podobná forma), subakutně a chronicky (klasická, nervová forma).
Klasická forma (nervová) onemocnění je častější u kuřat ve věku 4 až 22 týdnů. Vyznačuje se poškozením periferního a centrálního nervového systému, a proto mohou být příznaky onemocnění různé: kulhání, paréza a ochrnutí končetin, křídel, krku, ocasu. U některých jedinců je zaznamenána poloparalýza. Barva duhovky („šedooké“) a tvar a velikost zornice se mohou změnit, což vede k částečné nebo úplné slepotě. Obvykle pták zemře 3-5 měsíců po objevení prvních příznaků onemocnění.
Nádorově podobná (leukémii podobná) forma onemocnění se vyznačuje rychlým šířením a vyšší mortalitou. Tato forma se vyznačuje klinickými příznaky připomínajícími ptačí leukémii. Ptáci zpravidla onemocní ve věku 30–160 dnů. U některých jedinců je možná paréza a paralýza končetin a křídel. Hlavní klinické příznaky: špatné trávení, ztráta hmotnosti, odmítání krmení, ztráta síly, abnormální postavení těla, hlavy, křídel, nohou, ocasu. Tyto změny jsou způsobeny tvorbou nádorů ve vnitřních orgánech, což vede k celkovému narušení tělesného stavu ptáka. V tomto případě jsou nejčastěji postižena játra, vaječník a žlázový žaludek. Nejvyšší procento (až 30 %) úmrtí je pozorováno 1-2,5 měsíce od začátku propuknutí onemocnění.
V některých chovech drůbeže dochází k tzv. kožní formě onemocnění, charakterizované převažujícím poškozením péřových folikulů, které výrazně zvětšují svůj objem v důsledku množení buněk v nich. Kůže zároveň připomíná „rybí šupiny“.
patologické změny.Při otevření mrtvého ptáka se zjistí přítomnost nádorových uzlin ve vaječníku, varlatech, játrech, slezině, ledvinách, žlázovém žaludku, střevech a burze. Kromě toho je detekována hyperplazie péřových folikulů („rybí šupiny“), šedé oči a deformace zornice, stejně jako ztluštění sedacích a bederních nervových plexů.
Diagnóza.Instaluje se komplexně s ohledem na klinická a epidemiologická data, patologické změny a laboratorní výsledky.
Diagnóza se považuje za stanovenou, když je virus izolován z patologického materiálu; detekce virových antigenů v klinickém materiálu; stanovení specifických protilátek v krevním séru s přihlédnutím ke klinickým a epidemiologickým údajům.
Markovu nemoc je nutné odlišit od lymfoidní leukémie, infekční encefalomyelitidy, newcastleské choroby, ptačí chřipky, listeriózy, hypovitaminózy skupiny B, E a D a některých otrav.
Léčba.Nevyvinuté.
Preventivní a kontrolní opatření.Pro vytvoření umělé imunity se používá: suchá kultura virové vakcíny proti Markově chorobě z kmene FS-126 krůtího herpesviru a suchá kultivační virová vakcína proti Markově chorobě z kmene „ARRIAH“ pro vakcinaci brojlerů.
Po stanovení diagnózy je drůbežárna prohlášena za nebezpečnou a jsou zavedena omezení. Za jejích podmínek je zakázán prodej násadových vajec a živé drůbeže, je zastavena inkubace a přijímání mláďat k odchovu a utraceno veškeré ptactvo z nefunkční drůbežárny. Drůbež, která je neproduktivní a podezřelá z onemocnění, je utracena a zlikvidována. Jsou chovány linie kuřat odolných vůči Markově chorobě.
Omezení se ruší v nepřítomnosti Markovy choroby u ptáka po provedení konečných veterinárních a hygienických opatření.
